agar citrato de simmons

agar citrato de simmons

Agar MacConkey

Agar MacConkey

agar eosina azul de metileno

agar eosina azul de metileno

agar para estafilococos no.110

agar para estafilococos no.110

Caldo de Urea.

Caldo de Urea.

Uso

Se emplea para la diferenciación de bacterias por medio de la utilización de la urea como única fuente de carbono.

Principio

La enzima ureasa hidroliza la urea en amoníaco y anhídrido carbónico, ante la variación de pH por la alcalinización, el indicador rojo de fenol, vira de amarillo claro a ligeramente rosado o rosa mexicano.

Se utiliza solamente para la detección de la actividad de la ureasa en especies del género Proteus que dan la prueba positiva después de una incubación de 8 h. Si los nutrientes suministrados por el extracto de levadura se consumen antes de que la bacteria muestre un crecimiento aceptable no podrá determinarse con exactitud su capacidad de hidrolizar la urea. Si un microorganismo es capaz de hidrolizar la urea, pero no de utilizar el amoníaco como fuente de nitrógeno, no se produce crecimiento y es posible observar un resultado falso negativo. No se recomienda para las bacterias con reacción de ureasa retardada. Sembrar el medio de cultivo con el cultivo puro de ensayo. Incubar 24 – 48 h a 35ºC.  En ocasiones hasta 72 horas.

Se utiliza para la valoración de la producción de ureasa por algunas enterobacterias. Este medio contiene glucosa, peptona, urea y rojo de fenol. Las bacterias que producen ureasa a partir de la urea dan lugar al carbonato de amonio y el indicador se vuelve rojo púrpura. Obsérvese en la tabla de reacciones bioquímicas que solo el género Proteus da esta reacción positiva.

 Figura No. 1  Control de actividad.

 Características de identidad.

1.    Utilización de urea como fuente de carbono.

2.     La enzima ureasa hidroliza la urea en amoniaco y anhídrido carbónico, ante la variación del pH por la alcalinización el indicador Rojo Fenol, vira de amarillo claro a ligeramente rosado o rosa mexicano.

3.    Se utiliza solamente para la detección de la ureasa en especies del género Proteus.

4.    Si los nutrientes suministrados por el extracto de levadura se consumen antes que la bacteria muestre crecimiento no podrá determinarse con exactitud su capacidad de hidrolizar urea.

5.    Pero si es capaz de hidrolizar la urea, pero no utilizar el amoniaco como fuente de nitrógeno, no se produce crecimiento y puede dar un falso negativo.

Kligler Hierro Agar

Kligler Hierro Agar

Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiología de alimentos para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa y lactosa, y a la producción de ácido sulfhídrico.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe ³⁺, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y  producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante.
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.

Fórmula (en gramos por litro)		INSTRUCCIONES
Peptona de carne	13.0	Suspender  54.8 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.
Cloruro de sodio	5.0
Lactosa	10.0
Tripteina	10.0
Glucosa	1.0
Citrato de hierro y amonio	0.5
Tiosulfato de sodio	0.3
Rojo de fenol	0.025
Agar	15.0
pH final: 7.3 ± 0.2

Siembra
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, sembrar el medio de cultivo, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.

Incubación
A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.

Resultados
1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.

Microorganismo	Pico/Fondo	Producción de gas	Producción de ácido sulfhídrico
E. coli ATCC 25922	A/A	+	-
K. pneumoniae ATCC700603	A/A	+	-
P. mirabilis ATCC 43071	K/A	+	+
S. typhimurium ATCC 14028	K/A	-	+
S. enteritidis ATCC 13076	K/A	+	+
S. flexneri ATCC 12022	K/A	-	-
P. aeruginosa ATCC 27853	K/K	-	-

A: ácido

K: alcalino

Características del medio
Medio preparado: rojo


Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código:  B02-234-05	x 500g :Código:  B02-234-06